LGR5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420320-ACT

O Lgr5 de camundongo codifica o receptor acoplado à proteína G com repetições ricas em leucina 5 (LGR5), um marcador bem estabelecido de populações de células-tronco adultas e progenitoras nas criptas intestinais, nos folículos pilosos e em outros epitélios em renovação. O LGR5 potencializa a sinalização canônica de Wnt/β-catenina ao se ligar às R-spondinas e modular a atividade de RNF43/ZNRF3, sustentando a manutenção das células-tronco, a proliferação e o comprometimento de linhagem. Alterações na expressão de Lgr5/LGR5 têm sido associadas à regeneração e ao remodelamento epiteliais desregulados em contextos inflamatórios e neoplásicos, tornando-o um nó útil para investigar programas dirigidos por Wnt. Como um receptor associado à “stemness”, o LGR5 é frequentemente utilizado para acompanhar o potencial clonogênico e para dissecar dinâmicas de sinalização dependentes do nicho.

LGR5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lgr5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LGR5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lgr5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lgr5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LGR5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lgr5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LGR5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LGR5 em células tumorais com expressão de Lgr5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.