LDH-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416429

概要

LDHB は、乳酸脱水素酵素（lactate dehydrogenase: LDH）のサブユニットである LDH-B をコードしており、乳酸とピルビン酸の相互変換を触媒すると同時に NADH/NAD⁺ サイクルを回す、細胞質に存在する主要酵素です。ピルビン酸の利用と乳酸のクリアランスを調節することで、LDH-B は解糖系、ミトコンドリアの酸化的代謝、そしてレドックス恒常性の協調に寄与し、酸素や栄養条件が変動する状況下でのエネルギー産生に影響を与えます。LDHB の活性は細胞ストレスや分化に伴う代謝リプログラミングにも関与し、LDH アイソザイムのバランス変化は、さまざまな疾患関連の文脈において、低酸素応答や増殖性代謝に結び付いた表現型と関連付けられています。代謝の結節点（ノード）として、LDH-B は機序解明研究において、解糖系の制御点、ミトコンドリア機能、乳酸シグナル伝達と併せて検討されることが多い分子です。

LDH-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLDHB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LDHB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LDHBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LDH-Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LDH-Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LDHB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LDH-Bの機能に不可欠なLDHBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LDHBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LDH-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLDH-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LDHB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LDH-B HDRプラスミド（h）および LDH-B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLDHBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLDHB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。