Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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LDH-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416429
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- LDH-B O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico LDH-B, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:LDH-B Anticorpo (431.1): sc-100775
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
LDH-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-416429 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
LDHB codifica a subunidade LDH-B da lactato desidrogenase, uma enzima citosólica fundamental que catalisa a interconversão entre lactato e piruvato, com a concomitante ciclagem de NADH/NAD⁺. Ao regular a utilização de piruvato e a depuração do lactato, a LDH-B ajuda a coordenar a glicólise, o metabolismo oxidativo mitocondrial e a homeostase redox, influenciando a produção de energia sob condições variáveis de oxigénio e nutrientes. A atividade de LDHB contribui para a reprogramação metabólica durante o stress celular e a diferenciação, e alterações no equilíbrio de isoenzimas de LDH têm sido associadas a fenótipos ligados a respostas à hipóxia e ao metabolismo proliferativo em diversos contextos relevantes para doenças. Como nó metabólico, a LDH-B é frequentemente analisada em conjunto com pontos de controlo glicolítico, função mitocondrial e sinalização por lactato em estudos mecanísticos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO LDH-B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene LDHB em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do LDHB, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do LDHB na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína LDH-B.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de LDHB para a investigação da sinalização de LDH-B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) LDHB críticos para a função LDH-B
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos LDHB para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo LDH-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo LDH-B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus LDHB. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo LDH-B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR LDH-B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia LDHB para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo LDHB definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.