LASP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404630-ACT

LASP1 codifica a proteína 1 com domínios LIM e SH3 (LASP-1), um adaptador do citoesqueleto enriquecido em adesões focais, lamelipódios e redes de actina associadas à membrana, onde coordena interações proteína–proteína que regulam a forma e a motilidade celular. Ao acoplar parceiros de ligação à actina a complexos de adesão e de sinalização, a LASP-1 influencia processos como migração, invasão e remodelação dinâmica da matriz extracelular. A expressão e a localização subcelular de LASP1 são frequentemente estudadas no contexto da transição epitélio–mesênquima, do comportamento metastático e da remodelação de vias de sinalização de adesão. A atividade desregulada de LASP1 tem sido associada a alterações na organização do citoesqueleto e na sinalização proliferativa em múltiplos tipos de tumor, sustentando o seu uso como um nó funcional na investigação da biologia de células cancerígenas.

LASP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LASP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LASP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LASP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LASP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LASP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LASP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LASP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LASP-1 em células tumorais com expressão de LASP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.