LAP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403613-ACT

O TMPO humano codifica a polipeptídeo 2 associado à lâmina (LAP2), uma proteína da membrana nuclear interna que se liga às laminas e à cromatina para organizar a arquitetura nuclear e regular a estabilidade do genoma. As isoformas de LAP2 apoiam a remontagem do envelope nuclear após a mitose, a ancoragem da heterocromatina periférica e a coordenação de programas de replicação e reparo do DNA acoplados à progressão do ciclo celular. Por meio dessas funções estruturais e regulatórias, o TMPO influencia a compartimentalização transcricional e a integridade nuclear ligada à mecanotransdução. Alterações na expressão ou na localização de TMPO/LAP2 têm sido associadas a defeitos na morfologia nuclear e são frequentemente investigadas em estudos de distúrbios proliferativos e de vias relacionadas a laminopatias.

LAP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMPO sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LAP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMPO em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMPO, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LAP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMPO nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LAP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LAP2 em células tumorais com expressão de TMPO silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.