LAMP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400215-ACT

O LAMP2 codifica a proteína de membrana associada ao lisossomo 2 (LAMP-2), uma importante glicoproteína da membrana lisossomal necessária para a biogênese e a integridade dos lisossomos. A LAMP-2 sustenta o fluxo autofágico e as vias de degradação lisossomal, incluindo a macroautofagia e a autofagia mediada por chaperonas, influenciando assim a renovação de proteínas, lipídios e organelas danificadas. Por meio de seu papel no tráfego endolisossomal e em eventos de fusão, a LAMP-2 impacta as respostas ao estresse celular, a homeostase metabólica e o processamento de antígenos. Alterações na expressão ou na função de LAMP2 estão ligadas a fenótipos de armazenamento lisossomal e relacionados à autofagia e têm sido associadas à cardiomiopatia e à miopatia esquelética na doença de Danon, bem como a mecanismos mais amplos de doenças neurodegenerativas e inflamatórias que envolvem depuração lisossomal prejudicada.

LAMP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LAMP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LAMP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LAMP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LAMP-2 em células tumorais com expressão de LAMP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.