Plásmido Doble Nickase (h) Lamin B1: sc-400032-NIC

LMNB1 codifica la lamina B1, un componente central de la lámina nuclear que polimeriza bajo la membrana nuclear interna para mantener la forma del núcleo, la organización de la cromatina y la mecanotransducción. La lamina B1 participa en la desintegración y el reensamblaje de la envoltura nuclear durante la mitosis, regula la replicación y la reparación del ADN, e influye en la transcripción mediante dominios asociados a la lámina que posicionan la heterocromatina en la periferia nuclear. La alteración de la dosis o de la organización de la lamina B1 se ha vinculado con defectos en la mielinización y fenotipos neurodegenerativos y, de forma más amplia, con vías que gobiernan la estabilidad del genoma, la progresión del ciclo celular y la arquitectura nuclear. Como andamiaje para la señalización y las interacciones con la cromatina, la lamina B1 se estudia con frecuencia en el contexto de la senescencia celular, la diferenciación y las respuestas al estrés.

Lamin B1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LMNB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LMNB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LMNB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LMNB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.