L-type Ca++ CP α1F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416338
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- L-type Ca++ CP α1F O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico L-type Ca++ CP α1F, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:L-type Ca++ CP α1F Anticorpo (1H6): sc-517005
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
L-type Ca++ CP α1F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-416338 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CACNA1F codifica a subunidade α1F, formadora do poro, de um canal de cálcio do tipo L dependente de voltagem, que medeia o influxo de Ca2+ em células excitáveis e acopla a despolarização da membrana à sinalização intracelular. A atividade do canal molda processos dependentes de cálcio, incluindo a transmissão sináptica, a libertação de neurotransmissores e a expressão génica regulada pela atividade, por meio de vias como CaM/CaMK e a sinalização calcineurina–NFAT. Na retina humana, a função de CACNA1F é particularmente importante para a neurotransmissão de fotorrecetores para células bipolares e para o processamento dos sinais visuais. A disrupção genética de CACNA1F tem sido associada a doenças retinianas hereditárias e a fenótipos do neurodesenvolvimento, sustentando a sua relevância para o estudo da biologia dos canais de Ca2+ e dos mecanismos de doença.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1F (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CACNA1F em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CACNA1F, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CACNA1F na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína L-type Ca++ CP α1F.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CACNA1F para a investigação da sinalização de L-type Ca++ CP α1F, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CACNA1F críticos para a função L-type Ca++ CP α1F
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CACNA1F para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo L-type Ca++ CP α1F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo L-type Ca++ CP α1F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CACNA1F. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo L-type Ca++ CP α1F Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR L-type Ca++ CP α1F (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CACNA1F para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CACNA1F definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.