KV4.3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404247-ACT

KCND3 codifica a subunidade do canal de potássio humano dependente de voltagem KV4.3, um mediador principal das correntes de potássio do tipo A, rápidas e transitórias, que moldam a repolarização do potencial de ação e a frequência de disparo. A função do KV4.3 integra-se às redes de excitabilidade de membrana em neurônios e cardiomiócitos, influenciando a integração sináptica, a dinâmica de condução e a sinalização dependente da atividade. Ao ajustar a cinética de repolarização e os limiares de excitabilidade, KCND3 cruza-se com vias que governam a sinalização elétrica, o acoplamento de cálcio e programas transcricionais a jusante responsivos à despolarização. Perturbações genéticas e funcionais em KCND3 têm sido associadas a distúrbios de excitabilidade, incluindo fenótipos neurológicos como a ataxia espinocerebelar e anomalias elétricas cardíacas, reforçando sua relevância em estudos focados em mecanismos.

KV4.3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCND3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KV4.3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCND3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCND3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KV4.3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCND3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KV4.3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KV4.3 em células tumorais com expressão de KCND3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.