KV1.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421214

概要

Kcna3 は電位依存性カリウムチャネル KV1.3 をコードしており、KV1.3 は Shaker ファミリーに属するチャネルとして、膜電位やカリウム流出を調節し、カルシウムシグナル、活性化閾値、電気的興奮性の形成に関与します。免疫細胞やグリア細胞では、KV1.3 の活性が Ca2+ 依存的な転写プログラムを制御することで、増殖、サイトカイン産生、代謝リプログラミングに結びつくシグナル伝達カスケードに影響を与えます。チャネル機能は細胞周期進行やストレス応答を司る経路とも交差しており、KV1.3 活性の変化は免疫調節異常や炎症機構との関連が示されています。神経系では、KV1.3 は神経炎症および神経—グリア間コミュニケーションに関わる興奮性やシグナル動態に寄与します。

KV1.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるKcna3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Kcna3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Kcna3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KV1.3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KV1.3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Kcna3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KV1.3の機能に不可欠なKcna3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Kcna3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KV1.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKV1.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Kcna3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KV1.3 HDRプラスミド（m）および KV1.3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKcna3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKcna3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。