KV1.1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403806-NIC

KCNA1は、ヒトの電位依存性カリウムチャネルサブユニットKV1.1をコードしており、興奮性細胞における膜の再分極および活動電位発火を規定する主要因子です。KV1.1は外向きのK⁺電流を担うことで、神経細胞の内在性興奮性、シナプス伝達、スパイクのタイミングを調節し、イオン恒常性や活動依存的なシグナル伝達経路と結び付いています。KCNA1機能の変化は過興奮性を特徴とする神経学的表現型と関連しており、ネットワークの安定性を形作る機構の研究において重要な標的となります。生物医学研究では、KV1.1はチャネル複合体の組み立て、軸索伝導、ならびに興奮性異常疾患の分子基盤における役割について、一般に広く検討されています。

KV1.1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。