Kremen-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403791

Visão geral

KREMEN1 codifica a Kremen-1, um recetor transmembranar de passagem única, mais conhecido como parceiro de ligação de alta afinidade das proteínas Dickkopf (DKK), modulando a sinalização canónica Wnt/β-catenina. Ao formar complexos com LRP5/6 e DKK1, a Kremen-1 promove a internalização do recetor e atenua programas transcricionais induzidos por Wnt que controlam decisões de destino celular, proliferação e homeostase tecidular. Devido a esta ligação de vias, o KREMEN1 tem sido estudado em contextos em que o desequilíbrio da via Wnt contribui para fenótipos do desenvolvimento e para a reprogramação da sinalização associada a doenças, incluindo cenários de investigação relacionados com cancro e com osso. A sua localização na membrana e as interações recetor–ligando também o tornam útil para dissecar a comunicação cruzada entre vias à superfície celular e a regulação génica a jusante dependente de β-catenina.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Kremen-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KREMEN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KREMEN1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KREMEN1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Kremen-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KREMEN1 para a investigação da sinalização de Kremen-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KREMEN1 críticos para a função Kremen-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KREMEN1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Kremen-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Kremen-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KREMEN1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Kremen-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Kremen-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KREMEN1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KREMEN1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.