KLRG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424537-ACT

O gene Klrg1 de camundongo codifica o KLRG1, um receptor inibitório do tipo lectina C (C-type lectin-like) expresso de forma proeminente em subpopulações efetoras diferenciadas e de memória de células NK e de linfócitos T CD8+. Ao se ligar a caderinas clássicas, como a E-caderina, presentes em células-alvo, o KLRG1 transmite sinais inibitórios que modulam a citotoxicidade, a produção de citocinas e a capacidade proliferativa, conectando sinais de adesão a uma regulação do tipo “checkpoint” imune. O KLRG1 é amplamente utilizado como marcador de maturação e estado funcional de células imunes, e alterações na sinalização de KLRG1 têm sido associadas a mudanças nas respostas imunes antivirais e antitumorais, ao envelhecimento do sistema imune e à inflamação crônica. Essas características fazem do Klrg1 um ponto relevante para estudar regulação imune, vigilância tecidual e persistência de células efetoras em modelos de doença.

KLRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Klrg1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KLRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Klrg1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Klrg1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KLRG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Klrg1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KLRG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KLRG1 em células tumorais com expressão de Klrg1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.