Klotho Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421290-ACT

O gene **Kl** em camundongos codifica a **Klotho**, uma proteína de membrana do tipo I que pode ser clivada e liberada, formando um fator circulante com efeitos amplos no metabolismo mineral e na homeostase dos tecidos. A Klotho atua como um co-receptor obrigatório para a sinalização endócrina de **FGF**, especialmente **FGF23**, coordenando o manejo de fosfato, o metabolismo da vitamina D e o equilíbrio de cálcio. Além de seu papel endócrino, a Klotho tem sido associada à modulação de respostas ao estresse oxidativo e a programas ligados à senescência celular que influenciam a fisiologia renal, cardiovascular e do sistema nervoso. Alterações na expressão de Klotho são frequentemente estudadas em modelos de lesão renal crônica, declínio funcional associado ao envelhecimento e desregulação metabólica, para esclarecer mecanismos em nível de vias biológicas.

Klotho O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Kl sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Klotho O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Kl em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Kl, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Klotho. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Kl nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Klotho no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Klotho em células tumorais com expressão de Kl silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.