KLK5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404042-ACT

A peptidase 5 relacionada à calicreína (KLK5) é uma serino protease secretada, do tipo tripsina, que participa de cascatas proteolíticas extracelulares que controlam a descamação epidérmica, a homeostase da barreira e a defesa inata. A KLK5 regula o processamento de proteínas estruturais e ativa outras calicreínas, contribuindo para a remodelação da matriz pericelular e para a sinalização por meio de receptores ativados por protease (PARs). A desregulação da atividade da KLK5 tem sido associada a fenótipos inflamatórios cutâneos e a alterações na diferenciação epitelial, e a expressão de KLK5 é frequentemente estudada como um marcador do estado epitelial e da remodelação do microambiente. Em biologia do câncer e em pesquisa em dermatologia, a KLK5 é utilizada para investigar alterações impulsionadas por proteases em invasão, sinalização de citocinas e vias associadas à barreira.

KLK5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLK5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KLK5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLK5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLK5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KLK5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLK5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KLK5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KLK5 em células tumorais com expressão de KLK5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.