KLF17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414317-ACT

KLF17 (fator semelhante a Krüppel 17) é um fator de transcrição do tipo “zinc finger” que regula programas de diferenciação epitelial e redes transcricionais que controlam a adesão, a polaridade e a motilidade celular. Ao modular a expressão gênica por meio da ligação a promotores ricos em GC, o KLF17 se conecta a vias associadas à plasticidade epitélio–mesênquima, à remodelação do citoesqueleto e a saídas de sinalização MAPK/PI3K dependentes do contexto. A expressão desregulada de KLF17 tem sido associada a fenótipos invasivos alterados e à competência metastática em múltiplos modelos tumorais, tornando-o um nó relevante para estudos mecanísticos de progressão e de transições de estado celular. Em células humanas, a atividade de KLF17 é comumente investigada em relação a circuitos de repressão/ativação transcricional e à regulação de alvos downstream associados à EMT.

KLF17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLF17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KLF17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLF17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLF17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KLF17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLF17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KLF17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KLF17 em células tumorais com expressão de KLF17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.