Plásmido CRISPR de Activación (h) KLF12: sc-403992-ACT

KLF12 (factor similar a Krüppel 12) es un factor de transcripción con dedos de zinc C2H2 que se une a elementos promotores ricos en GC para regular programas de expresión génica que controlan la proliferación, la diferenciación y la plasticidad epitelio-mesenquimal. Como regulador nuclear, KLF12 se integra en redes transcripcionales que moldean la progresión del ciclo celular y la especificación de linaje, con efectos posteriores sobre la organización del citoesqueleto y la motilidad celular. La actividad o expresión alteradas de KLF12 se han vinculado a un control transcripcional desregulado en procesos relacionados con el cáncer, incluidos la invasión y el comportamiento metastásico, y también se ha estudiado en contextos regulatorios de genes relevantes para el desarrollo y el sistema endocrino. Modificar los niveles de KLF12 ofrece un enfoque manejable para diseccionar circuitos reguladores impulsados por factores de transcripción y el control específico del contexto entre potenciadores y promotores.

KLF12 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KLF12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KLF12 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KLF12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KLF12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KLF12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KLF12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KLF12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KLF12 en células tumorales con expresión de KLF12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.