KIR4.1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402244-NIC

KCNJ10 は内向き整流性カリウムチャネルサブユニット KIR4.1 をコードしており、カリウムのバッファリング、空間的な K+ 再分配、浸透圧恒常性を支える、グリア細胞および上皮細胞の膜電位を規定する主要因子である。中枢神経系では、アストロサイトにおける KIR4.1 活性が、グルタミン酸取り込みおよび水移動と連動した細胞外 K+ のクリアランスに寄与し、神経細胞の興奮性とネットワークの安定性に影響する。このチャネルは腎臓および内耳の上皮におけるイオン輸送過程にも関与し、K+ の取り扱いを組織の体液バランスと電気化学的平衡に結び付けている。KCNJ10 の機能異常や遺伝的多型は、神経の過興奮に関わる表現型や、脳・腎・聴覚機能を含む症候群性のチャネル病の病態と関連づけられており、イオン恒常性経路の機序解明研究における重要な標的となっている。

KIR4.1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNJ10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNJ10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNJ10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNJ10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。