KIF3B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403702-ACT

KIF3B codifica o membro 3B da família das cinesinas, uma subunidade essencial do complexo motor cinesina-2 heterotrimérico, que impulsiona o transporte anterógrado ao longo dos microtúbulos. Esse motor sustenta o transporte intraflagelar e a montagem do cílio primário, coordenando o tráfego de receptores de membrana e de componentes de sinalização necessários para vias dependentes de cílios, como Hedgehog e Wnt. Por meio de seu papel na dinâmica ciliar e no transporte polarizado, KIF3B influencia a progressão do ciclo celular, a organização epitelial e a função neuronal. A desregulação do transporte mediado por cinesina-2 e da sinalização ciliar está implicada em ciliopatias e tem sido associada a alterações na sinalização proliferativa e do desenvolvimento observadas em múltiplos contextos de doença.

KIF3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIF3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIF3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIF3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIF3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIF3B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIF3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIF3B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIF3B em células tumorais com expressão de KIF3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.