KIF3A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421275
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- KIF3A O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico KIF3A, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:KIF3A Anticorpo (E-5): sc-376680
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
KIF3A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421275 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Kif3a codifica o membro da família das cinesinas KIF3A, uma subunidade motora central do complexo heterotrimérico cinesina-2, que impulsiona o transporte intraflagelar anterógrado ao longo dos microtúbulos. A KIF3A é essencial para a montagem e a manutenção do cílio primário, permitindo a transdução de sinal dependente de cílios, incluindo a atividade da via Hedgehog, e processos mais amplos de tráfego ciliar que influenciam decisões de destino celular. Em sistemas murinos, a função de Kif3a está intimamente ligada à morfogênese dos tecidos e a programas de sinalização homeostática que dependem de cílios intactos, associando a sua perturbação a fenótipos relevantes para ciliopatias. Como resultado, a KIF3A é frequentemente utilizada para investigar como o transporte baseado em microtúbulos se integra à sinalização do desenvolvimento e à regulação, mediada por cílios, da proliferação e diferenciação.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KIF3A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Kif3a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Kif3a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Kif3a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KIF3A.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Kif3a para a investigação da sinalização de KIF3A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Kif3a críticos para a função KIF3A
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Kif3a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo KIF3A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo KIF3A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Kif3a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo KIF3A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR KIF3A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Kif3a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Kif3a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.