KIF3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403463

概要

KIF3Aはキネシン2モーターのサブユニットをコードしており、KIF3BおよびKAP3とともに、一次繊毛の形成および繊毛内輸送（intraflagellar transport）に必要な、微小管に基づく順行性輸送を駆動します。繊毛形成（ciliogenesis）における役割を通じて、KIF3Aはヘッジホッグ（Hedgehog）やWntなど、繊毛依存的なシグナル伝達経路を支え、細胞極性、分化、組織恒常性に影響を与えます。KIF3A機能の破綻は繊毛関連の表現型と関連しており、発生異常やシグナル伝達の破綻といった文脈で研究されています。ヒト細胞系では、KIF3Aの欠失は、繊毛輸送、受容体局在、ならびに下流の転写応答を解析するために一般的に用いられています。

KIF3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKIF3A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KIF3A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KIF3Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KIF3Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KIF3Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KIF3A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KIF3Aの機能に不可欠なKIF3Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KIF3Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KIF3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKIF3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KIF3A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KIF3A HDRプラスミド（h）および KIF3A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKIF3Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKIF3A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。