KIF3A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403463-ACT

KIF3A は、微小管に沿った ATP 依存的な順行性輸送を担うキネシン-2 モーターのサブユニットをコードしており、鞭毛内輸送（IFT）および一次繊毛の形成に必須です。繊毛内トラフィッキングにおける役割を通じて、KIF3A は、適切な繊毛構造とカーゴ輸送に依存する Hedgehog および Wnt シグナル伝達の出力を支持します。KIF3A の活性は、上皮の極性、神経発生、ならびに中心体—繊毛軸における協調的な細胞内シグナル伝達に寄与します。KIF3A に関連する繊毛輸送およびシグナル伝達の破綻は、繊毛病（ciliopathy）に関連した表現型や、気道生物学および腫瘍細胞の挙動に影響する機構に関与することが示唆されています。

KIF3A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KIF3Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KIF3A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KIF3A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKIF3A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KIF3Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKIF3A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKIF3A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKIF3A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKIF3A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。