KIF2C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404645-ACT

KIF2C (também conhecido como MCAK) codifica uma despolimerase de microtúbulos da família cinesina-13 que regula a dinâmica dos microtúbulos do fuso e as ligações entre cinetócoro e microtúbulo durante a mitose. Ao promover a renovação dos microtúbulos, o KIF2C favorece o alinhamento (congressão) e a segregação corretos dos cromossomos ao longo do ciclo celular e em processos associados ao checkpoint mitótico. A desregulação da expressão ou da atividade de KIF2C está ligada à instabilidade cromossômica e à aneuploidia, fenótipos moleculares frequentemente observados na biologia de doenças proliferativas. Assim, KIF2C é amplamente estudado em vias que governam a fidelidade mitótica, a organização do centrosomo/fuso e a manutenção do genoma.

KIF2C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIF2C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIF2C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIF2C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIF2C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIF2C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIF2C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIF2C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIF2C em células tumorais com expressão de KIF2C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.