KIF20A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403194-ACT

KIF20A (também conhecido como MKLP2) codifica uma proteína motora do tipo cinesina que se associa aos microtúbulos para coordenar a progressão mitótica, particularmente durante a anáfase e a citocinese. Ela contribui para a organização do fuso central e para a abscisão por meio da regulação da localização do complexo passageiro cromossômico e de quinases mitóticas-chave, conectando a atividade de KIF20A a vias de controle do ciclo celular e de estabilidade do genoma. A expressão desregulada de KIF20A tem sido relatada em múltiplos contextos tumorais e é frequentemente utilizada como marcador associado à proliferação em estudos de programas oncogênicos de divisão celular. Como resultado, KIF20A é amplamente relevante para investigar a fidelidade mitótica, a dinâmica do fuso e mecanismos que acoplam a citocinese à aneuploidia e às respostas celulares ao estresse.

KIF20A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIF20A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIF20A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIF20A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIF20A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIF20A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIF20A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIF20A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIF20A em células tumorais com expressão de KIF20A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.