KIF1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403727-ACT

KIF1B codifica um motor de microtúbulos da família das cinesinas-3 que promove o transporte anterógrado dependente de ATP de organelos membranares e cargas, contribuindo para o tráfego axonal, a distribuição mitocondrial e o movimento de vesículas. Ao regular o transporte baseado em microtúbulos, o KIF1B ajuda a manter a polaridade neuronal e a homeostase celular, processos que se cruzam com vias que controlam a dinâmica mitocondrial e a sinalização intracelular. Alterações na expressão ou na função de KIF1B têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos e também têm sido estudadas no contexto da biologia tumoral, refletindo o seu papel na sobrevivência celular e nas respostas ao stress. Estas propriedades tornam o KIF1B um alvo relevante para dissecar mecanismos dependentes de transporte subjacentes à função do sistema nervoso e a estados celulares associados a doença.

KIF1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIF1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIF1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIF1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIF1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIF1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIF1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIF1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIF1B em células tumorais com expressão de KIF1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.