Keratin 2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402077-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Keratin 2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Keratin 2ダブルニカースプラスミド（h）およびKeratin 2ダブルニカースプラスミド（h2）は、KRT2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Keratin 2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Keratin 2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT2はケラチン2をコードしており、ケラチン2はII型中間径フィラメントタンパク質の一種です。主に基底層より上層のケラチノサイト（suprabasal keratinocytes）で発現し、I型ケラチンとヘテロ二量体を形成して表皮の細胞骨格ネットワークを構築します。ケラチン2は、機械的強度、細胞間接着、ならびに表皮の層構造形成（層状化）に伴う適切な分化に寄与し、デスモソーム関連の接着複合体や、中間径フィラメントのストレス応答性リモデリングとも統合的に機能します。KRT2機能の変化はフィラメント構造の組織化と表皮の健全性を損ない、病的バリアントは表在性表皮融解性魚鱗癬（superficial epidermolytic ichthyosis）を含む角化異常症と関連します。ケラチンフィラメントの動態は、バリア形成、角化（cornification）、および機械的／炎症性ストレスへの応答を制御する経路と交差するため、KRT2は皮膚恒常性や細胞骨格制御を研究するうえで有用な標的です。
Keratin 2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KRT2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KRT2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KRT2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KRT2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。