Keratin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402077-ACT

KRT2 codifica a queratina 2, uma proteína de filamento intermediário do tipo II expressa predominantemente em queratinócitos suprabasais, onde forma pares com queratinas do tipo I para reforçar a integridade do citoesqueleto. Os filamentos de queratina 2 integram-se com desmossomos e hemidesmossomos para sustentar a coesão epidérmica, a resistência mecânica e uma diferenciação ordenada durante a maturação do epitélio estratificado. Alterações na expressão de KRT2 ou na montagem dos filamentos afetam a dinâmica da rede de queratinas, as respostas celulares ao stress e a homeostase da barreira, e estão associadas a distúrbios hereditários de queratinização caracterizados por fragilidade cutânea. Como componente citoesquelético ligado à diferenciação, o KRT2 é amplamente utilizado como leitura molecular em estudos do desenvolvimento epidérmico, da biomecânica epitelial e da remodelação induzida por stress.

Keratin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KRT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Keratin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KRT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KRT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Keratin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KRT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Keratin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Keratin 2 em células tumorais com expressão de KRT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.