KDEL receptor 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402751-ACT

O KDELR1 humano codifica o receptor KDEL 1, um receptor de recuperação residente no Golgi que reconhece motivos do tipo KDEL na extremidade C-terminal de chaperonas solúveis do RE e medeia o seu transporte retrógrado do Golgi para o retículo endoplasmático por meio de vesículas revestidas por COPI. Ao sustentar a proteostase do RE e apoiar a via secretória, o KDELR1 influencia a sinalização de estresse do RE, a dinâmica da resposta a proteínas mal dobradas e o controle de qualidade de proteínas nascentes. A perturbação do tráfego RE–Golgi e da reciclagem de chaperonas é amplamente relevante para condições caracterizadas por disfunção secretória e estresse proteotóxico, incluindo biologia do câncer, neurodegeneração e estados inflamatórios. Assim, o KDELR1 constitui um ponto útil para investigar como a homeostase do tráfego molda os desfechos de sinalização e a aptidão celular sob estresse.

KDEL receptor 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDELR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KDEL receptor 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDELR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDELR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KDEL receptor 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDELR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KDEL receptor 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KDEL receptor 1 em células tumorais com expressão de KDELR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.