KCNQ3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403544-ACT

KCNQ3 codifica a subunidade do canal de potássio dependente de voltagem Kv7.3, um componente central das correntes de K⁺ do tipo M em neurônios, que estabilizam o potencial de membrana e limitam disparos repetitivos. Ao moldar a excitabilidade sub-limiar e a adaptação da frequência de disparo, KCNQ3 influencia a integração sináptica e as oscilações de rede, interagindo com a sinalização colinérgica e dependente de fosfoinositídeos que modula a abertura do canal. Alterações na expressão ou na função de KCNQ3 têm sido associadas a fenótipos de neurodesenvolvimento e epilepsia, destacando sua relevância para estudos de excitabilidade cortical e homeostase de circuitos. Assim, o KCNQ3 humano é amplamente utilizado em pesquisas mecanísticas sobre regulação de canais iônicos, vias de sinalização neuronal e relações genótipo–fenótipo em distúrbios de excitabilidade.

KCNQ3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNQ3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KCNQ3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNQ3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNQ3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KCNQ3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNQ3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KCNQ3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KCNQ3 em células tumorais com expressão de KCNQ3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.