KChIP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403327-ACT

KCNIP2 codifica a proteína sensora neuronal de cálcio KChIP2, uma subunidade auxiliar ligante de Ca2+ do tipo EF-hand que modula os canais de potássio Kv4 dependentes de voltagem, do tipo A. Ao ajustar a cinética de abertura/fechamento do canal e a sua expressão na superfície celular, a KChIP2 influencia a excitabilidade da membrana, a repolarização do potencial de ação e a sinalização dependente de Ca2+ em tecidos excitáveis, incluindo o coração e o sistema nervoso. Alterações na expressão de KCNIP2/KChIP2 têm sido associadas ao remodelamento elétrico e à suscetibilidade a arritmias, e também são estudadas no contexto da excitabilidade neuronal e de programas transcricionais responsivos ao estresse. Essas propriedades tornam o KCNIP2 um alvo útil para dissecar a regulação de canais iônicos, interações proteicas dependentes de cálcio e vias relevantes para a eletrofisiologia.

KChIP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNIP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KChIP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNIP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNIP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KChIP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNIP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KChIP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KChIP2 em células tumorais com expressão de KCNIP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.