KCC2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402080

概要

SLC12A5は、ニューロン特異的なK⁺/Cl⁻共輸送体KCC2をコードしており、細胞内塩化物（Cl⁻）恒常性の主要な調節因子として、GABA作動性およびグリシン作動性神経伝達を過分極性に成立させます。KCC2はCl⁻の細胞外排出を駆動することで、抑制性シナプス強度、膜興奮性、神経回路の成熟を形作り、活動依存的可塑性を制御するイオン輸送やシナプスシグナル伝達経路とも機能的に連携します。KCC2の発現または機能の変化は、中枢神経系における興奮―抑制バランスの破綻と関連づけられており、てんかん、神経発達障害、神経障害性疼痛、神経変性の研究における重要性が示唆されています。KCC2はまた、抑制性シナプスの発達、塩化物動態、ネットワーク振動を検討するためのマーカーおよび機序解析上の結節点としても用いられます。

KCC2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC12A5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC12A5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC12A5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KCC2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KCC2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC12A5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KCC2の機能に不可欠なSLC12A5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC12A5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KCC2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKCC2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC12A5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KCC2 HDRプラスミド（h）および KCC2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC12A5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC12A5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。