KAI 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401317-ACT

CD82 (KAI1) é uma glicoproteína tetraspanina de superfície celular que organiza microdomínios de membrana e modula a sinalização ao interagir com integrinas, receptores da família EGFR e outras tetraspaninas. Por meio da regulação da adesão, migração e dinâmica do citoesqueleto, KAI1 influencia processos como o tráfego de células imunes, interações com a matriz extracelular e comunicação vesicular. CD82 tem sido amplamente estudada no contexto da biologia da metástase, na qual a expressão alterada se correlaciona com mudanças no potencial invasivo e com fenótipos associados à transição epitélio–mesênquima. A desregulação de redes de sinalização dependentes de CD82 também tem sido associada à progressão tumoral e à remodelação do microambiente inflamatório em múltiplos modelos de doença.

KAI 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD82 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KAI 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD82 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD82, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KAI 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD82 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KAI 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KAI 1 em células tumorais com expressão de CD82 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.