JunD Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400713-ACT

O JUND humano codifica a JunD, um fator de transcrição do tipo zíper de leucina básico no complexo AP-1, que integra a sinalização MAPK/ERK e JNK para regular programas dependentes do contexto em proliferação, diferenciação, adaptação ao estresse e apoptose. Ao dimerizar com membros das famílias JUN e FOS, a JunD liga-se a elementos do tipo TRE/CRE para modular a expressão de genes de resposta imediata e respostas transcricionais associadas à cromatina. A JunD participa da homeostase redox e de vias responsivas a citocinas e fatores de crescimento, influenciando o controle do ciclo celular e a função mitocondrial sob estresse oxidativo. A atividade desregulada de AP-1 envolvendo fatores da família JUN, incluindo a JunD, está ligada a redes transcricionais oncogênicas, sinalização inflamatória e remodelamento aberrante da expressão gênica específica de tecidos no câncer e em outras doenças complexas.

JunD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JUND sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JunD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JUND em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JUND, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JunD. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JUND nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JunD no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JunD em células tumorais com expressão de JUND silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.