Junctophilin-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401805-ACT

JPH2は、横行小管／細胞膜と筋小胞体（サルコプラズミックレチiculum）との間に形成される接合膜複合体を、横紋筋において安定化する構造的な膜係留タンパク質であるジャンクトフィリン2をコードする。これらの膜を近接した状態に保つことで、ジャンクトフィリン2は電位依存性Ca²⁺チャネルとリアノジン受容体の機能的カップリングを介した、効率的な興奮–収縮連関およびカルシウム誘発性カルシウム放出を支える。JPH2は、心筋細胞および骨格筋におけるCa²⁺制御、膜マイクロドメインの組織化、ならびにストレス応答性の接合部構造リモデリングに関与する。JPH2の発現または機能の変化は、不整脈原性の表現型と関連する状況を含め、遺伝性および後天性の心筋症で観察されるカルシウム恒常性の破綻や構造リモデリングと関連づけられている。

Junctophilin-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性JPH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Junctophilin-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における JPH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はJPH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Junctophilin-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のJPH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJunctophilin-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびJPH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJunctophilin-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。