JunB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400493-ACT

JUNB codifica JunB, um fator de transcrição da família AP-1 que responde rapidamente a sinais mitogênicos e de estresse para regular programas de expressão gênica que controlam proliferação, diferenciação e apoptose. JunB integra sinalização das vias MAPK/ERK e JNK e coopera com proteínas Fos para modular a atividade de enhancers e promotores em diferentes contextos de células imunes e estromais. Na biologia humana, alterações na atividade de JUNB têm sido associadas a sinalização inflamatória desregulada, diferenciação hematopoética aberrante e redes transcricionais oncogênicas, o que o torna um nó útil para estudar o controle transcricional dependente do contexto. JUNB também é frequentemente usado como marcador de leitura e como regulador em respostas induzidas por citocinas, transições do ciclo celular e remodelamento do estado da cromatina.

JunB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JUNB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JunB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JUNB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JUNB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JunB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JUNB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JunB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JunB em células tumorais com expressão de JUNB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.