JIK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408228-ACT

TAOK3 (TAO kinase 3), também conhecido como JIK, codifica uma quinase de serina/treonina da família STE20 que atua como regulador a montante da sinalização de MAPK. O TAOK3 participa de vias responsivas ao estresse, incluindo a modulação das cascatas de p38 e JNK, e contribui para a dinâmica do citoesqueleto, o controle do ciclo celular e a sinalização relacionada à apoptose. Por meio do controle, dependente de fosforilação, de quinases downstream e de proteínas de ancoragem (scaffold), influencia respostas transcricionais a estresse celular e a sinais de crescimento. A atividade ou expressão desregulada de TAOK3 tem sido associada a fenótipos proliferativos e migratórios alterados na biologia do câncer e a perturbações mais amplas de sinalização relevantes para processos de neurodesenvolvimento e inflamação.

JIK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAOK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JIK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAOK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAOK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JIK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAOK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JIK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JIK em células tumorais com expressão de TAOK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.