Jagged2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401322-ACT

O JAG2 humano codifica a Jagged2, um ligante ancorado à membrana para receptores NOTCH que medeia sinalização justácrina para regular decisões de destino celular, compromisso de linhagem e padronização tecidual. A ativação de Notch induzida por Jagged2 influencia programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação e apoptose, com fortes conexões com a manutenção de células-tronco/progenitoras e processos de desenvolvimento. A desregulação da sinalização JAG2/Notch tem sido associada a estados alterados de diferenciação epitelial e hematopoiética e tem sido investigada em contextos como sinalização oncogênica, modulação imune e distúrbios do desenvolvimento. Como um nó da via, Jagged2 é frequentemente utilizada para explorar a comunicação cruzada dependente de Notch com as redes de sinalização Wnt, TGF-β e inflamatórias.

Jagged2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JAG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Jagged2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JAG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JAG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Jagged2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JAG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Jagged2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Jagged2 em células tumorais com expressão de JAG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.