Jagged1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421197-ACT

O Jag1 de camundongo codifica a Jagged1, um ligante canônico ligado à membrana para receptores NOTCH, que controla a sinalização juxtácrina durante o desenvolvimento embrionário e a homeostase de tecidos no adulto. A interação Jagged1–NOTCH regula a ativação proteolítica do receptor e programas transcricionais a jusante envolvendo fatores HES/HEY, que influenciam a especificação do destino celular, a formação de fronteiras e decisões de diferenciação em múltiplas linhagens. No camundongo, Jag1 contribui para o remodelamento vascular, a neurogênese e as interações entre células imunes, e sua desregulação é amplamente utilizada para modelar alterações na atividade da via Notch em anomalias do desenvolvimento e em contextos de sinalização oncogênica ou fibrótica. Como a Jagged1 atua na superfície celular, ela também é relevante para estudos de dinâmica ligante–receptor, ativação de Notch dependente de endocitose e controle, mediado pelo nicho, de estados de células progenitoras.

Jagged1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Jag1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Jagged1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Jag1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Jag1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Jagged1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Jag1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Jagged1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Jagged1 em células tumorais com expressão de Jag1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.