ITPase Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-410841-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ITPaseO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ITPase (h) e o Plasmídeo Double Nickase ITPase (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ITPA. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ITPase Anticorpo (A-4): sc-514409
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ITPase Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-410841-NIC | 20 µg | $410.00 |
O ITPA humano codifica a inosina trifosfato pirofosfatase (ITPase), uma enzima de “higienização” do pool de nucleotídeos que hidrolisa trifosfatos de purinas não canônicos, como ITP e dITP, para impedir sua incorporação incorreta em RNA e DNA. Ao limitar ácidos nucleicos contendo inosina, a ITPase sustenta a fidelidade da replicação, a integridade transcricional e processos mais amplos de manutenção do genoma ligados ao reparo por excisão de base e às respostas ao estresse replicativo. A perturbação da atividade de ITPA altera o metabolismo de purinas e pode aumentar a sensibilidade a desequilíbrios nos pools de nucleotídeos, com efeitos posteriores sobre a estabilidade do DNA mitocondrial e nuclear. Variações genéticas ou redução da função da ITPase têm sido associadas à suscetibilidade a fenótipos de dano a ácidos nucleicos e a respostas diferenciais em estudos do metabolismo de análogos de purinas, tornando-a relevante para investigações mecanísticas da integridade genômica.
ITPase O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITPA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITPA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITPA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITPA interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.