Islet-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421157

概要

マウスIsl1は、LIM-ホメオドメイン型転写因子Islet-1（ISL1）をコードしており、発生期の神経系、膵臓、心血管組織における系譜特異化と分化の主要な制御因子です。ISL1は、LIM結合コファクターやホメオボックスネットワークとの文脈依存的な相互作用を介して、前駆細胞の維持、細胞運命決定、成熟を制御する転写プログラムを統合的に調節します。膵島の生物学では、Isl1は内分泌遺伝子発現と機能的成熟を支える一方、運動ニューロンおよび心臓前駆細胞ではパターニングや形態形成に寄与します。そのため、ISL1活性の破綻は、糖尿病関連の膵島機能不全の機序解析、先天性心疾患の発生、ならびにマウスモデルにおける神経発生経路の研究において重要な関連性を持ちます。

Islet-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるIsl1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Isl1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Isl1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Islet-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Islet-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Isl1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Islet-1の機能に不可欠なIsl1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Isl1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Islet-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIslet-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Isl1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Islet-1 HDRプラスミド（m）および Islet-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIsl1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIsl1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。