ISCA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406334

Visão geral

O ISCA2 codifica uma proteína mitocondrial conservada, necessária para a maturação e o tráfego de aglomerados ferro–enxofre (Fe–S), dando suporte à montagem de enzimas dependentes de Fe–S envolvidas na fosforilação oxidativa, na tradução mitocondrial e na homeostase redox. Por meio de seu papel na via ISC de etapa tardia, o ISCA2 ajuda a manter a função da cadeia respiratória e protege as células do estresse metabólico associado ao transporte de elétrons prejudicado. A disrupção de ISCA2 tem sido associada à disfunção mitocondrial e a fenótipos neurodegenerativos consistentes com defeitos na biogênese de aglomerados Fe–S. Como resultado, o ISCA2 é frequentemente estudado no contexto do controle de qualidade mitocondrial, do metabolismo energético e de vias que conectam o manejo de ferro à estabilidade do genoma e às respostas celulares ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ISCA2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ISCA2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ISCA2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ISCA2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ISCA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ISCA2 para a investigação da sinalização de ISCA2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ISCA2 críticos para a função ISCA2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ISCA2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ISCA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ISCA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ISCA2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ISCA2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ISCA2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ISCA2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ISCA2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.