IRS-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400096-ACT

O gene humano **IRS1** codifica o substrato do receptor de insulina 1 (IRS-1), uma proteína adaptadora central que acopla os receptores ativados de insulina e de IGF-1 às vias de sinalização PI3K–AKT–mTOR e RAS–MAPK a jusante. Por meio do recrutamento, dependente de fosforilação em tirosina, de efetores com domínio SH2, o IRS-1 regula a captação de glicose, a síntese de glicogênio, a tradução proteica, o crescimento celular e a sobrevivência, enquanto a fosforilação em serina/treonina fornece um controle-chave de feedback negativo. A sinalização desregulada do IRS-1 e os padrões de modificações pós-traducionais são amplamente usados como leituras moleculares em estudos de resistência à insulina, estresse metabólico e fenótipos impulsionados por fatores de crescimento. Alterações na expressão de **IRS1** ou na conectividade de sua rede de sinalização também foram investigadas em contextos que incluem diabetes tipo 2, inflamação associada à obesidade e metabolismo de células cancerosas.

IRS-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRS-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRS-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRS-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRS-1 em células tumorais com expressão de IRS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.