IRP-2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401710-NIC

O gene humano **IREB2** codifica a **proteína reguladora de ferro 2 (IRP-2)**, um fator citosólico de ligação a RNA que controla o metabolismo do ferro no nível pós-transcricional ao reconhecer **elementos responsivos ao ferro** em mRNAs-alvo. A IRP-2 modula a estabilidade e a tradução de transcritos-chave envolvidos no manejo de ferro, incluindo o **receptor de transferrina (TFRC)** e subunidades de **ferritina (FTH1/FTL)**, coordenando assim a captação, o armazenamento e a utilização do ferro. Sua atividade é estreitamente acoplada à disponibilidade celular de ferro e ao estado redox, interagindo com a função mitocondrial, a biossíntese de heme e vias de estresse oxidativo. A desregulação da sinalização de IREB2/IRP-2 tem sido implicada na dis-homeostase do ferro observada em quadros de neurodegeneração, fenótipos relacionados à anemia e respostas de estresse relevantes à ferroptose, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos de homeostase de metais.

IRP-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus IREB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de IREB2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função IREB2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com IREB2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.