IRF-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424785-ACT

O gene Irf7 de camundongo codifica o IRF-7, um regulador transcricional mestre das respostas de interferon tipo I que coordena a imunidade inata antiviral a jusante de receptores de reconhecimento de padrões, como os receptores do tipo RIG-I e os receptores Toll-like. Quando ativado, o IRF-7 integra a sinalização decorrente da fosforilação dependente de TBK1/IKKε e da translocação nuclear para induzir programas de genes estimulados por interferon por meio do eixo JAK–STAT. A atividade de Irf7 molda a sinalização inflamatória, as respostas de células dendríticas e macrófagos e a comunicação cruzada com redes de citocinas mediadas por NF-κB. Assinaturas de interferon dependentes de IRF-7 desreguladas são relevantes em modelos de suscetibilidade viral, inflamação crônica e patologia semelhante à autoimunidade, sustentando estudos mecanísticos de processos de doença impulsionados por interferon.

IRF-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Irf7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRF-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Irf7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Irf7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRF-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Irf7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRF-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRF-7 em células tumorais com expressão de Irf7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.