IRE1α Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400576-LAC

ERN1 codifica a enzima 1 alfa requeridora de inositol (IRE1α), uma quinase/endoribonuclease transmembranar residente no retículo endoplasmático (RE) que atua como sensor primário de proteínas mal dobradas e como um iniciador-chave da resposta a proteínas mal dobradas (UPR). Perante stress do RE, a IRE1α oligomeriza e autofosforila-se, ativando saídas de RNase que incluem o splicing não convencional do mRNA de XBP1 para produzir o fator de transcrição XBP1s e a degradação regulada dependente de IRE1 (RIDD) de transcritos selecionados, remodelando a capacidade secretora. Estas atividades integram-se com a proteostase, o metabolismo lipídico, a autofagia e a sinalização inflamatória através do crosstalk da UPR com vias como NF-κB e JNK. A sinalização desregulada de ERN1/IRE1α está associada à adaptação ao stress celular no cancro, em contextos de doença metabólica, na neurodegeneração e na diferenciação de células imunitárias, tornando-se um alvo/nó amplamente utilizado em estudos mecanísticos da sinalização de stress do RE.

As Partículas de Ativação Lentivirais IRE1α (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ERN1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais IRE1α (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ERN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de IRE1α. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ERN1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.