IRAK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421100

概要

Irak1 は、インターロイキン1受容体関連キナーゼ1（IRAK-1）をコードしており、IRAK-1 はセリン／スレオニンキナーゼとして、マウスの自然免疫細胞において IL-1 受容体および Toll 様受容体（TLR）の活性化下流で中心的なシグナル伝達因子として機能します。受容体刺激後、IRAK-1 は MyD88 依存性シグナル伝達に関与し、IRAK–TRAF6 複合体の形成を協調して NF-κB および MAPK 経路の活性化と、それに続く炎症関連遺伝子の発現を促進します。IRAK-1 はさらに、サイトカイン産生、インターフェロン応答の制御、ユビキチン依存性シグナル伝達やインフラマソーム関連過程とのクロストークにも寄与します。IRAK-1 シグナルの破綻は、慢性炎症や自己免疫の実験モデル、感染感受性、ならびに炎症に関連した腫瘍微小環境の表現型と関連しています。

IRAK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるIrak1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Irak1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Irak1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IRAK-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IRAK-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Irak1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IRAK-1の機能に不可欠なIrak1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Irak1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IRAK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIRAK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Irak1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IRAK-1 HDRプラスミド（m）および IRAK-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIrak1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIrak1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。