Plásmido CRISPR de Activación (h) IPP-1: sc-402634-ACT

PPP1R1A codifica el inhibidor de la proteína fosfatasa 1 (IPP-1), un modulador regulado por fosforilación que se une a PP1 y suprime su actividad catalítica para ajustar la magnitud y la temporización de la desfosforilación de serina/treonina. Al integrar señales de cAMP/PKA y de otras vías de quinasas, IPP-1 influye en procesos dependientes de la fosforilación, incluida la regulación de canales iónicos, la dinámica del citoesqueleto y el control transcripcional. La actividad de PPP1R1A se asocia con la señalización neuronal y la plasticidad sináptica mediante el control de sustratos dependientes de PP1, y la alteración de la inhibición de fosfatasas se ha vinculado con señalización desregulada en contextos neuropsiquiátricos y neurodegenerativos. Como nodo en el equilibrio fosfatasa-quinasa, PPP1R1A ofrece una herramienta manejable para estudiar redes de fosforilación y la reprogramación de vías aguas abajo.

IPP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP1R1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IPP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP1R1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP1R1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IPP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP1R1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IPP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IPP-1 en células tumorales con expresión de PPP1R1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.