IP3R-III Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-421194-LAC

Itpr3 codifica o receptor de inositol 1,4,5-trifosfato tipo 3 (IP3R-III), um canal de liberação de Ca²⁺ do retículo endoplasmático ativado a jusante da sinalização de GPCRs e de receptores tirosina-quinase, por meio do IP3 gerado pela PLC. Transientes de Ca²⁺ mediados por IP3R-III regulam processos como secreção, transporte epitelial, bioenergética mitocondrial e expressão gênica dependente de Ca²⁺, por vias como calcineurina–NFAT e sinalização por CaMK. Em tecidos de camundongo, a expressão de IP3R-III é enriquecida em linhagens epiteliais e secretoras, sustentando estudos de sinalização de Ca²⁺ polarizada, sítios de contato RE–mitocôndria e oscilações de cálcio acopladas a estímulos. A atividade desregulada de IP3R-III e a homeostase de Ca²⁺ têm sido associadas a respostas de estresse celular e a fenótipos relevantes para doenças envolvendo disfunção epitelial e sinalização proliferativa aberrante, tornando Itpr3 um nó útil para modelagem mecanística.

As Partículas de Ativação Lentivirais IP3R-III (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Itpr3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais IP3R-III (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Itpr3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de IP3R-III. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Itpr3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.