IP3R-III CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402138-ACT

ITPR3は、イノシトール1,4,5-三リン酸受容体3型（IP3R-III）をコードしており、これは小胞体（ER）に存在するCa²⁺放出チャネルで、ホスホリパーゼCシグナル伝達の下流で産生されるIP3に応答して開口します。IP3R-IIIは、細胞内Ca²⁺オシレーションやマイクロドメインでのシグナル伝達を形成することで、分泌、上皮細胞の極性、ミトコンドリア代謝、ならびにCa²⁺依存性の転写プログラムを制御します。IP3R-IIIの機能はGPCRや受容体型チロシンキナーゼ経路とも交差しており、細胞外からの刺激をERのCa²⁺ダイナミクスおよびカルモジュリン依存性キナーゼやNFATシグナルなどの下流エフェクターへと結び付けます。ITPR3の発現変化やCa²⁺恒常性の破綻は、複数の疾患関連状況において、増殖制御の異常、ストレス応答、上皮リモデリングの破綻と関連づけられており、Ca²⁺シグナル伝達ネットワークの機序解明研究を支持する知見となっています。

IP3R-III CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITPR3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IP3R-III CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITPR3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITPR3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IP3R-IIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITPR3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIP3R-III依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITPR3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIP3R-III経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。