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IP3R-II慢病毒激活颗粒(m) | sc-421193-LAC | 200 µl | $455.00 |
Itpr2 编码肌醇 1,4,5-三磷酸受体2型(IP3R-II),这是一种位于内质网(ER)膜上的 Ca2+ 释放通道,可将磷脂酶C(PLC)产生的 IP3 信号转化为胞质 Ca2+ 瞬变。依赖 IP3R-II 的 Ca2+ 动员通过钙调蛋白信号、CaMK、钙调神经磷酸酶–NFAT 以及与 MAPK 的串扰等 Ca2+ 响应通路,协调分泌、收缩性、代谢和基因表达等过程。在小鼠组织中,Itpr2 参与细胞类型特异性的 Ca2+ 振荡动力学以及内质网–线粒体偶联,从而塑造生物能量学与应激反应。IP3R 介导的 Ca2+ 稳态失调常在细胞应激、兴奋性改变以及信号缺陷等背景下被研究,并与神经、心血管、上皮及代谢性疾病的生物学相关。
IP3R-II 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Itpr2 表达。
IP3R-II 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Itpr2转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性IP3R-II表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Itpr2 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。