IP Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404135-ACT

PTGIR codifica o recetor humano da prostaciclina (IP), um recetor acoplado à proteína G que se liga à prostaciclina (PGI2) para regular a sinalização vasodilatadora e antiagregante. Após a ativação, o recetor IP acopla-se principalmente à Gs para aumentar o cAMP e ativar programas de transcrição dependentes de PKA/CREB, com acoplamento adicional dependente do contexto que pode influenciar a sinalização de cálcio e as vias de MAPK. Este recetor integra a sinalização de eicosanoides derivados do ácido araquidónico para modular as interações endotélio–plaquetas, o tónus vascular e as respostas inflamatórias. A desregulação da sinalização PTGIR/IP tem sido implicada em fenótipos cardiovasculares e trombo-inflamatórios e é frequentemente estudada em modelos de disfunção vascular e de lesão tecidular mediada pelo sistema imunitário.

IP Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTGIR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IP Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTGIR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTGIR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IP Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTGIR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IP Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IP Receptor em células tumorais com expressão de PTGIR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.